Tekrarlayan implantasyon başarısızlığında sperm faktörünün yeri

... konulu sunumlar: "Tekrarlayan implantasyon başarısızlığında sperm faktörünün yeri"— Sunum transkripti:

1 Tekrarlayan implantasyon başarısızlığında sperm faktörünün yeri
Dr. Engin Enginsu, Ph.D. III. ÜREME TIBBI DERNEĞİ KONGRESİ 2011

2 Sperm Seçimi Neden Gerekli
IVF uygulamalarının ilk yıllarında sperm ayrıştırma yapılmıyordu Sperm seçimi Motil sperm Normal morfolojik sperm Testiküler dokudan sperm ekstraksiyonu Kromatin yapısı normal sperm… Fertilizasyon’dan sağlıklı çocuk doğumuna kadar etkili Tüm ART uygulamalarında fizyolojik inseminasyon hedeflenmeli

3 Semen Analizi En az iki spermiogram Ejakülat hacmi 1.5’ten 5.0 mL’ye
Sperm sayısı >15 milyon/mL WHO 2010 Hareket >%30 Progresif hareket >%30 Morfoloji >%4 normal (MEUSC) Ve: Aglütinasyon yok Piyospermi yok Viskosite normal

4 Sperm Anomali Oranı n=1776 SPERMED Laboratuvarı 2006

5 Morfoloji Baş Düzgün kontür oval Akrozom %40-%70
Ekvatorial segment konturlara uygun Boyun Kuyruk Değerlendirme 10x100 büyütmede 1: Kruger TF, et al. Fertil Steril. 1988; 49(1):112-7. 2: Kruger TF, et al., Urology ;30(3):

6 Morfoloji Semen analizi ile OPU günü arasındaki zaman morfolojiyi etkilemiyor (Sukcharoen N. Hum Rep’96) Strict Kriterler ile değerlendirildiğinde Fertil popülasyon cut-off %12 (Günalp S. Hum Rep’2001)

7 İzole Teratozoospermi
Total globozoospermi Makrosefal sperm Total pinhead IUI-D Uzun baş Varikosel İzole teratozoospermi IUI a engel değil

8 Makrosefal Sperm ve PGD
This result shows statistical significance (Kahraman et al.RBM Online, 2004)

9 Makrosefal Sperm (Kahraman et al.RBM Online, 2004)

10 Globozoospermi Üst sol resim:tunnel test,globolarda yüksek oranda DNA fragmantasyonu tunnel ile ortaya konmuştur.parlak yeşil olanlar apoptotik,mat yeşil olan normal sperm nüklear yapısı gösterir. Alt sol resim: transmission elektromikroskopi,contain abundant , disorganized cytoplasm in the head , circular ,condensed and multiple vacualed nuclear structure,and irregular disarrement of mitochondries. Sağ üst :acridine orange,immature nüclear structure seen there by florance staining tech. Sağ alt:sperm fish,(anıla sorulacak)

11 Globozoospermi Globozoospermi kromatinlerin sferik yapılanması ve akrozomal yapının tümüyle olmaması ile karakterize bir sendromdur. DNA yapısı bilinmiyor Sperm anöploidi oranında artış (vaka sunumu) (Carrell et al ) Anormal kromatin yapısı DNA zincir kırıkları (Calogero et al. 2002) Morfolojik değerlendirme ile tanı konur

12 Sperm Sentriol Bozuklukları
Sperm sentriolü fertilizasyon ile oosite girer, duplike olur ve sperm asterini oluşturur Sentriol bozuklukları Embryonik gelişme bozuklukları İmplantasyon başarısızlıkları Abortus(Van Blerkom, 1996) (Rawe et al., 2002) Consequently, any defect of sperm centriole can result in developmental arrest (Van Blerkom, 1996),implantation failure or preclinical abortion (Rawe et al., 2002)

13 Yüksek magnifikasyonda sperm seçimi IMSI
Gebelik versus 18.4% İmplantasyon 25.0±25.9 versus 5.9±12.9% Berkovitz et al. 2003, Hum Rep

14 Tekrarlayan IVF Başarısızlıklarında IMSI
Hazout a. 2006, RBM Online

15 Sperm DNA Hasarı Spermatogenez sırasında oluşan kromatin kondanzasyon bozuklukları Spermatogenez ya da üreme sistemindeki yollarda meydanagelebilecek apopitozis ROS nedeniyle oluşabilecek oksidatif stres

16 Sperm DNA Hasarı Fetal mutasyonlar ve doğacak bebekte kanser riski
Kötü embryo gelişimi İmplantasyonu azaltır Düşük gebelik oranları Tekrarlayan gebelik kayıpları Reviewed in Chohan, et al., J Androl 27: 53-59, 2006

17 Sperm DNA Hasarı Tanısal Testler COMET Assay Halosperm TUNEL
Chromomycin A3 Test DNA Breakage Detection-FISH Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA)

18 Comet Assay Agaroz üzerine yayılan spermlerde hücre elektroforezi
DNA migrasyonu değerlendirilir ANORMAL NORMAL Comparison of patient with DNA damage and a fertile male The incidence of DNA damage in infertile men is higher than fertile men Real-time modified alkaline SCGE assay showing fluorescent DNA unraveling from damaged sperm nucleus and forming comet tail. Am J Obstet Gynecol. 2001;184:1068

19 Halosperm DNA kırıklarının saptanması- FISH
Asit ile denatürasyon ve nüklear proteinlerin çıkmasından sonra halo değerlendirilmesi

20 TUNEL Test DNA kırıklarındaki tek ve çift sarmal kırıkların saptanması
TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) DNA kırıklarını araştırmaları için kullanılan en yaygın yöntem

21 TUNEL: Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin Nick End Labelling
NORMAL KROMATİN APOPTOTİK KROMATİN

22 Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA)
Acridine Orange Test Floresan mikroskop Flow cytometry Yeşil normal, kırmızı DNA kırıkları DNA Kırıkları = Kırmızı/Kırmızı + Yeşil İleri teknoloji malzeme gerekmekte

23 DFI, HDS Lin et.al. Fert. Ster. 2008

24 DFI, HDS Kennedy et. al. RBM Online 2011

25 Hyalüronik Asit (HA): Fizyolojik Sperm Seçimi
PH-20 proteini Hyalüronidaz dan farklı bir bağlanma bölgesine sahiptir (Gmaachl & Kreil, 93, Gacesa et al., 94) Sperm – Oosit Bağlanmasının Değerlendirilmesi Matür Sperm Normal Morfolojik Sperm (Kruger) Kromatin Yapısı Normal Sperm HBA ile IUI veya ICSI seçimi Gmaachl & Kreil, 93, Gacesa et al., 94

26 Hyaluron Binding Assay - HBA
Olgun Sperm Anöploidi düşük Yüksek Fertilizasyon OranıO

27 Hyaluron Binding Assay - HBA

28 HBA Sonuçlarının Değerlendirilmesi
>65% bound = good quality sperm Traditional IUI or IVF <65% bound = “low binders” 20% of infertile couples ICSI using PICSI or SpermSlow

29 Hyalüronik Asit (HA): Fizyolojik Sperm Seçimi
Parmegianni L et al JARG

30 Sperm Seçimi: Teknikler
Yıkama Swim – up Swim – out Testiküler spermin hazırlanması Gradient IMSI HA bağlı sperm

31 Sonuçlar İnseminasyon türü ne olursa olsun sperm seçimi ART başarısını etkileyen en önemli faktördür Sperm morfolojisi ve DNA bütünlüğü sağlıklı canlı doğumlarda önemli etkendir Sperm yıkama teknikleri standardize edilmelidir IMSI ve HA kullanımı ile fizyolojik ICSI hedeflenmelidir