Sunum yükleniyor. Lütfen bekleyiniz

Sunum yükleniyor. Lütfen bekleyiniz

MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ Dr. Fahri ŞAHİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematoloji Bilim Dalı.

Benzer bir sunumlar


... konulu sunumlar: "MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ Dr. Fahri ŞAHİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematoloji Bilim Dalı."— Sunum transkripti:

1 MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ Dr. Fahri ŞAHİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematoloji Bilim Dalı

2 MKH ÜRETİMİ ve SORUNLAR

3 Sorunlar Örnek alımı MNH eldesi Kültüre etme Tripsinizasyon Pasaj Tanımlama / Diferansiyasyon Etik / Yasal sorunlar

4 Örnek Alımı Kemik İliği Spongioz Kemik Kortikal Kemik

5 MNH tabakası Plazma Fikol Eritrosit Fikol KİA Nonadheren hücrelerin atılması Santrifüj 800g 20 Dak Yıkama saat inkübasyon Taze BY İnkübasyon

6

7 Tripsinizasyon Tripsin - EDTA 5 dk İnkübasyon

8

9 Tripsin blokajı ve yıkama Tekrar kültür ve tripsinizasyon ile 2-6 pasaj Serum içeren Media veya PBS 800G 10 dk

10 FBSFBS Son yıllara kadar MKH lerin in vitro ekspansiyonu için 10 % FETAL BOVİNE SERUM (FBS) kullanılıyordu Virüs, bakteri, prion bulaşı İmmün veya lokal inflamatuar reaksiyonlar Engrafman yetmezliği, rejeksiyon Otolog serum kullanımını gündeme getirmiştir

11 A B %1 OS C D %3 OS%10 FBS %10 OS Proliferasyon : C > D = B > A Osteojenik Dif. : C +++ > D ++ > B + > A 0 Adipojenik Dif. : D +++ > C ++ > B + > A 0 Norbert Stutea et al. Autologous serum for isolation and expansion of human mesenchymal stem cells for clinical use. Experimental Hematology 2004 (Hamburg, Germany)

12 Türler arasında farklılık İnsan, sıçan ve tavşanda MKH üretim nispeten kolay Farede üretim oldukça sıkıntılıdır

13 Farelerin 5-florourasil ile muamelesi CD11b’ ye karşı antikor ile immündeplesyon BY değişikliği: –DMEM yerine α-MEM –Düşük glukoz içerikli BY

14 1.Flowsitometrik değerlendirme CD11b, CD31, CD34 ve CD45 negatif SH2 (CD105), SH3 veya SH4 (CD73), CD117 (c-kit), CD90 (Thy-1) ve STRO-1 pozitif Üretilen MKH’ lerin Kalite Kontrolü

15 2. Diferansiyasyon özelliğinin değerlendirilmesi * Osteojenik diferansiyasyon * Kondrojenik diferansiyasyon * Adipojenik diferansiyasyon

16 Osteojenik Diferansiyasyon Alkalen fosfataz aktivitesi

17 ESM mineralizasyonu von Kossa boyası Kalsiyum fosfat (Apatit) birikimi ( X-Ray)

18 Kondrojenik Diferansiyasyon Gümüş mavisi boyası Safranin O boyası

19 Adipojenik Diferansiyasyon Lipidden zengin vakuollerin intraselüler birikimi Oil-Red O boyası

20 Good Manufacturing Practice GMP

21

22 That is not dead which can eternal lie, And with strange aeons even death may die Howard Lovecraft This is not the end This is not even the beginning of the end But it is the end of the beginning Winston Churchill For Tissue Engineering……


"MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ Dr. Fahri ŞAHİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematoloji Bilim Dalı." indir ppt

Benzer bir sunumlar


Google Reklamları