Diferansiyel (Ayırtedici) Boyama Bakterilerin gruplarını ayırtetmek için kullanılır. Gram Boyama Asit-Fast Boyama

GRAM BOYAMA En önemli ve en sık kullanılan ayırdedici bir boyama tekniğidir. Bakterileri hücre duvarlarının kimyasal ve fiziksel özelliklerine göre iki büyük gruba ayırmak için kullanılan bir yöntemdir.Bakteri örneğinin tanılanmasında ilk aşama olan Gr(+)/ Gr (-) ayırımının yapılmasında kullanılır. Bu metodu bulan kişi Danimarkalı bilim adamı Hans Christian Gram’dır.

Bakteriler Gr(+) ve Gr (-) olarak iki ana gruba ayrılırlar Bakteriler Gr(+) ve Gr (-) olarak iki ana gruba ayrılırlar. Bu farklılık gram boyama reaksiyonundan kaynaklanır. Gram reaksiyonu ise bakterilerin hücre çeperi farklılıklarından temellenir.

Cell walls of bacteria(1)

Gram - Gram +

-Hücre çeperi hücreyi dış etkilerden korur ve hücreye şakil verir. -Bakterilere dayanıklılığı veren esas yapı çeperde bulunan peptidoglikandır. - Peptidoglikan esas olarak 2 şeker türevinden ve bir grup amino asitten oluşur. Peptidoglikanda bulunan şekerler: - N-acetylglucosamine (NAG). - N-acetylmuramic acid (NAM). -Peptidoglikan tabakada bulunan amino asitler: -L-alanin -D-alanin -D-Glutamik asit -Lisin (Gr +) veya DAP (Gr -)

Peptidogikan yapısı

Gram Pozitif: - Peptidoglikan tabakası kalın. - Teikoik asit oldukça büyük miktarda bulunur.

Gram Negatif: - Gram (+)’lerden daha kompleksdir.. - Kalın dış membran; lipidleri, lipopolisakkaridleri ve lipoproteinleri içerir. - peptidoglycan tabaka incedir.

The Gram-negative outer membrane(1)

Gram-Negatif ve Gram-Positif Bakteriler Arasındaki Farklılıklar Gram-Negatif Bakteri Gram-Pozitif Bakteri Hücre çepri kompleks. Kalınlığı 10nm Basit hücre çeperi. Kalınlığı 20-80nm Hücre duvarında 2 tabaka var Hücre duvarındaki tabaka sayısı 1 Peptidoglikan ince. Oldukça kalın. Teikoik asid yok Teikoik asid var Lipid ve lipoprotein içeriği %58 %0-3 Lipopolisakkarid %13 %0 Protein içeriği %9 Penicilin’e duyarlı değil Duyarlı Kırmızı pembe görünür Mor renkte görünür.

Gram Boyama Prosedürü

crystal violet for one minute wash with water a small drop of water spread the bacteria/water mixture completely air dry a small amount of the bacteri 3 times to heat-fix crystal violet for one minute wash with water gram's iodine solution for one minute and wash with water. wash with %95 etanol for 10 seconds and wash with water safranin for one minutes and wash with water

Gram Boyama

ilk boya mordant dekolorizasyon karşıt boya pozitif negatif

Gram Boyama Gram + hücreler Gram – hücreler İlk boya Crystal violet Mor Mordant: Iodine Dekolorize ajan: Alkol Renksiz Karşıt boya: Safranin Pembe/kırmızı

Gram Boyama Proteus vulgaris G-basil Streptococcus pneumoniae G+ kok Staphylococcus epidermidis G+ kok

Gram boyama – karışık kültür

Mikrometrik lam (her aralık 10 µm= 0,01mm) Mikrometrik oküler

Örnek: Mikrometrik okülerde bir streptobasilin boyu 5, eni 1 aralıktır Örnek: Mikrometrik okülerde bir streptobasilin boyu 5, eni 1 aralıktır. Mikrometrik okülerin 10 aralığı mikrometrik lamın 1 aralığına eşit ise basilin eni ve boyu kaç µm’dir? mikrometrik okülerin 10 aralığı 1 lam aralığı ise? mikrometrik okülerin 1 aralığı ?