MİKROORGANİZMALARIN İNVİTRO ÜREME GÖRÜNÜMÜ Tüp, petri kutusu veya benzeri kaplar içinde bulunan üretici ortamlarda mikropların çoğalmasına in vitro üreme, bunun aksine deney hayvanı ya da canlı dokuda çoğalmalarına da in vivo üreme denir. BAKTERİ KOLONİLERİ: Katı ve özellikle plak şeklindeki katı besiyerlerinin içine veya yüzeyine ekim yapıldığında bakteriler uygun seyreklikte ekilirse ayrı ayrı düşerler. Bu suretle ayrı düşmüş tek bir bakteri bulunduğu yerde üreyerek sınırlı bir bakteri topluluğu meydana getirir ki buna koloni adı verilir. Genel olarak bakterilerde koloni tipleri şunlardır:

1. ) S- koloniler: Bakterilerde en çok görülen kolonilerdir 1.) S- koloniler: Bakterilerde en çok görülen kolonilerdir. Yuvarlak, düzgün kenarlı, kabarık, düzgün yüzeyli, nemli ve homojen kolonilerdir. Örneğin Staphylococcus 2.) R-koloniler: S-koloni yapan bakterilerin eski kültürlerinde veya uygunsuz koşullarda üretilme ile meydana gelen koloniler bu tipte olduğu gibi bazı tür bakterilerin normal kolonileri de R kolonisi şeklindedir. Yüzeyleri buruşuk veya tanecikli, kenarları girintili çıkıntılı, basık, yassı görünüm verirler. Örneğin Salmonella, C. diphteriae 3.) M- koloniler: Bir kısım bakterilerin hücre çeperlerinin dış tabakasında polisakkarit ve bazen polipeptit yapısında az veya çok miktarlarda kapsül maddesinin bulunduğu bilinmektedir. Belirli şekilde kapsülü olan bakteriler organizmadan ilk ayrıldıkları zaman zengin ve özellikle serumlu kanlı besiyerlerinde üretilirse bunların sümüksü görünüşlü yapışkan ve akıcı koloniler oluşturdukları görülür. Mukoid veya M-koloni adı verilen bu kolonilerden uygunsuz koşullarda yapılan pasajlarda kapsüllerini kaybederek S tipinde kolonilerin oluştuğu görülür. Uygun ortamlarda bakteriler yeniden kapsüllenir ve M- koloni oluştururlar. M kolonilere öze değdirilince iplik gibi uzama görülür. Tipik hücre duvarı oluşturmayan mikroorganizmalar katı ortamlarda üst ve yanları düzensiz, ortaları düğmeli ve granüllü koloniler meydana getirirler. Bu kolonilere L- koloni denir.

Saf Kültür Elde Etme Kültür: Bir besleyici ortamda üretilmiş olan mikroorganizmaların tümüne verilen addır. Saf kültür: Yalnız bir tür mikroorganizmadan oluşmuş olup kuramsal olarak tek bir mikroorganizmanın uygun üreme ortamında üremesi ile oluşan kültür saf kültür olarak kabul edilir. Suş (=Köken) : Herhangi bir ortamdan soyutlanarak elde edilen ve bütün özellikleri belirlenmiş olan saf kültürlerdir.

Aktarma Teknikleri ve Ekim Ekim, inokülasyon ve aşılama isimleriylede anılmaktadır. İnokülasyon incelenecek örneğin steril bir besiyerinin üstüne ya da içine aktarma tekniklerinden yararlanarak uygun bir şekilde aktarılması olayıdır. Tüpteki sıvı besiyerine inokülasyon: İlk olarak aktarılacak sıvı kültür tüp içinde kuvvetlice çalkalanır. Böylece örnek veya kültürdeki mikroorganizmaların bulundukları sıvı içinde homojen dağılımı sağlanır. Tüp sol ele alınır. Öze sağ elde kalem gibi tutularak bunzen beki alevinde steril edilir. (akkor hale gelinceye kadar tutulur sol elde tutulan tüpün ağzındaki pamuk, öze tutulan sağ elin küçük parmağıyla çevrilerek çıkarılır. Tüpün ağız kısmı alevden geçirilir ve tüp hafif eğilerek öze ucu sıvı örneğe daldırılır.(Öze ucunun soğutulması için cam tüpün kenarlarına değdirilir.Öze ucu karışıma batırılır ve tüpe değdirmeden dışarıya çıkarılır. ‘Bir öze dolusu örnek’ alınmış olur. Bir öze dolusu örnek deyimi sıvı örneğin öze ucundaki halkanın iç kısmına ince bir film halinde yayılmasını tarif etmek için kullanılmaktadır. Diğer taraftan katı besiyerindeki veya yatık agardaki kültürden örnek alınacaksa steril özenin ucu koloniye hafifçe temas ettirilerek örnek alınır. Örnek aldığımız sıvı kültür tüpünün ağzı alevden geçirilir ve pamuk tıkanır. Tüp portüpe yerleştirilir. Sonra sol ele steril sıvı besiyerini içeren tüp alınır. Daha önce anlatıldığı şekilde pamuğu çıkarılır ve tüpün ağzı alevden geçirilir. Öze tüp içine sıvı seviyesine kadar sokulur ve besiyerine daldırılarak özeye karıştırma işlemi yapılır. Öze ucu besiyerinden çıkarılarak tüpün ağzı alevden geçirilir ve pamuk tıkanır. Sonra öze ucuda bunzen bekinde steril edilir. Eğer özenin ucunda katı besiyerinden alınmış numune varsa tüpteki sıvı besiyerine daldırmadan önce tüpün iç kısmına kuru bir bölgeye değdirilir ve sürtme hareketleri yaptırılarak mikroorganizmaların dağılması sağlanır. Daha sonra sıvı besiyeriyle karıştırılır.

b- Petri kutusundaki agarlı besiyerine ekim: Petri kutusundaki agarlı besiyerlerine sürme, yayma ve dökme plak yöntemlerinden birisi uygulanır. Çizgi Ekim:

Tek Koloni Düşürme Yöntemi Sürme yöntemi Öze uygun bir yöntemle steril edilir ve üremiş bir besiyerinde öze, boş bir bölgede soğutulur. Örnek alınır ve temiz bir besiyerinin kenarına hafifçe ezilerek yayılır. Bu alan öze ile çizilir ve ekim alanının 1. bölgesi oluşturulur. Öze bunzen bekinde steril edilir ve besiyerinin boş bir alanında soğutulur. 1. bölgeye iki kere girilmek üzere 2. bir ekim alanı oluşturulur. Bunu 3. ve 4. bölge takip eder.