Serumda Ürik asit ve Üre Tayini

MODİFİYE KARBONAT FOSFOTUNGSTAT YÖNTEMİ Materyal: Serum Prensip: Ürik asidin alkali ortamda fosfotungustik asit ayıracı ile okside edilmesi ve fosfotungustik asidin redüklenmesi sonucu mavi rengin oluşumu esasına dayanır. Meydana gelen mavi renkli çözeltinin 690 nm dalga boyunda optik dansitesi ölçülerek ürik asit miktar tayini yapılır.

Deneyin Yapılışı: 1) Bir deney tüpüne 8 ml distile su üzerine 1 ml serum ve 0.5 ml 0.7N H2SO4 eklenir, karıştırılır. Buna da 0.5 ml %10 sodyum tungustat çözeltisi eklenir ve yeniden karıştırılır. 1/10 serum filtratı hazırlanır. 2) Üç adet deney tüpü alınır. Birincisine 3 ml distile su, ikincisine 3 ml çalışma standartı, üçüncüsüne de 3 ml serum filtratı konur. Tüplerden birincisi kör, ikincisi standart olarak kullanılır. 3) Her tüpe birer ml %14 sodyum karbonat çözeltisi ve birer ml fosfotungustik asit ayıracı eklenir. Tüpler karıştırılır ve 15 dakika kendi halinde bırakılır. 4) 690 nm dalga boyunda standart ve örneğin optik dansiteleri okunur.

Hesaplama Örneğin optik dansitesi -------------------------------- X 1 X Sulandırma çarpanı = % mg Ürik Asit Standartın optik dansitesi 1/10 luk filtrattan hareketle deney yapıldığından sulandırma çarpanı 10 dur. Modifiye karbonat fosfotungustat yöntemine göre Normal Değerler: Serum: 3-6 mg/100 ml İdrar : 250-750 mg/24 saat

SERUMDA ÜRE MİKTAR TAYİNİ (Modifiye Berthelot Yöntemi) Prensip: Serum, plazma veya idrardaki üre, üreazın etkisiyle NH3 ve CO2’e parçalanır. Berthelot metodunda NH3, katalizör olarak sodyum nitroprussiyat kullanmak suretiyle fenol hipoklorit reaksiyonu ile tayin edilir. Materyal:Serum

Deneyin Yapılışı: 1. Serum örneği ve kör için iki deney tüpü alınır. 2. Birinci tüpe 0.2 ml serum, 10 ml %1 EDTA çözeltisi ve bir spatül ucu üreaz konur. 3. Kör olarak kullanılacak ikinci tüpe ise 10.2 ml %1 EDTA çözeltisi ve bir spatül ucu üreaz konur. 4. Her iki tüp 55-57°C’lik su banyosunda 15 dakika bekletilir. 5. Tüpler su banyosundan çıkarılır ve soğutulur. 6. Birinci tüpten 1 ml bir deney tüpüne aktarılır, üzerine 1 ml fenol renk ayıracı ve 1 ml alkali hipoklorit ayıracı konur. 7. İkinci tüpten 1 ml alınır, üzerine 1 ml fenol renk ayıracı ve 1 ml alkali hipoklorit ayıracı konur. 8. Tüpler karıştırılır, yeniden 55-57°C su banyosunda 3 dakika bekletilir. 9. Tüpler soğutulur, her tüpe 7 ml distile su konur, karıştırılır. 10. 5 dakika sonra köre karşı 525 nm de okunur. 11. Kalibrasyon grafiğinden serumdaki üre miktarı hesaplanır.  

Kalibrasyon grafiğinin çizilmesi Deneyin Yapılışı: 1.5 adet deney tüpü alınır ve aşağıda gösterilen şekilde ayıraçlar konur. KÖR %31.25 mg %62.5 mg %125 mg %250 mg ---------------------------------------------------------------------------------------------------- (NH4)2SO4 çal. çöz. (ml) - 0.125 0.250 0.500 1.000 Distile su (ml) 8 7.875 7.750 7.500 7.000 Fenol ayıracı (ml) 1 1 1 1 1 Alkali hipoklorit çöz.(ml) 1 1 1 1 1 2. Tüpler 55-57°C lik su banyosunda 3 dakika bekletilir. 3. Su banyosundan çıkarılır, 5 dakika bekletilir, köre karşı 525 nm de okunur. 4. Absorbans değerlerinin konsantrasyona karşı grafiği çizilir.   Normal Değerler: Modifiye berthelot yöntemine göre kan üresi 20-35 mg/100 ml dir ve bu değer %8-20 mg üre azotuna karşılıktır.

Standart eğri

Referanslar BİYOKİMYA PRATİK FÖYÜ (2004)