Mikrobiyoloji Kültür Sayımı Dr. N. Oya SAN KESKİN

Quiz

Dilüsyon (Seyreltme) İstatistiksel bir kural olarak dökme ve yayma kültürel sayım yöntemlerinde bir Petri kutusundaki koloni sayısının 30 -300, damla kültür yönteminde ise her damlada 10 -30 arasında bulunması gerekir. 1 g yoğurtta 108 adet canlı bakteri olduğu varsayılırsa, 1 g yoğurdun doğrudan Petri kutusuna alınması halinde 108 sayıda koloni oluşacaktır. Bu kadar fazla sayıda koloninin Petri kutusunda sayılması olanaksızdır. Bu gibi canlı mikroorganizma sayısı yüksek olan örneklerde sayım, dilüsyon (seyreltme) tekniği ile yapılır.

Seyreltmede 1: 9 Oranı Hesaplamalarda kolaylığın ve standartlığın sağlanması amacı ile dilüsyon genellikle 1:9 oranı ile yapılır. Bu, 1 birim örnek + 9 ml FTS (veya başka bir steril dilüsyon çözeltisi) demektir. Toplam 10 birim hacmin 1 birimi materyalden (ya da 1 önceki dilüsyon tüpünden) gelmektedir. 1:9 oranında dilüsyon, materyaldeki sayının, 10 'un katları şeklinde azalmasını sağlar.

Kültürel Sayım Yöntemleri Koloni Sayımı prensibi mikroorganizmanın katı besiyerinde koloni oluşturması, bu kolonilerin sayılarak örnekteki mikroorganizma sayısının hesaplanmasıdır. Dökme, yayma ve damlatma olarak 3 şekilde uygulanır

Dökme Yöntemi 1 ml örnek steril Petri kutusuna pipetlenir, üzerine 45 C 'a kadar soğutulmuş agarlı besiyerinden yaklaşık 15 ml dökülür, besiyeri ile örnek karıştırılır, besiyeri katılaştıktan sonra petri kutuları inkübasyona bırakılır. Dezavantajları sıcak dökülen besiyerinin mikroorganizmaya zarar verme olasılığının yüksek olması, besiyerinin petrilere ekim yapılıncaya kadar erimiş halde tutulması ve bunun besiyeri üzerine olumsuz etkisi, herhangi bir ekim hatasında yedek besiyeri kullanımındaki sıkıntılar, mikroorganizmaların petri kutusunun tabanına veya besiyeri yüzeyine yakın olmalarına bağlı olarak oksijenden farklı düzeyde faydalanmaları ve dolayısı ile farklı düzeyde gelişmeleridir

Yayma Yöntemi Yayma yönteminin esası, önceden petri kutularına dökülüp katılaştırılmış (hatta bu şekilde stoklanmış) ve belirli bir düzeyde kurutulmuş besiyerleri üzerine 0,1 ml örnek aktarılarak drigalski spatülü denilen kıvrık bir cam baget ile bu miktarın besiyeri yüzeyine yayılmasıdır.

Damlatma Yöntemi Damlatma yönteminde ise 0,01 (ya da 0,05 ; besiyeri uygun ise 0,1) ml örnek Petri kutusunda önceden dökülmüş, katılaştırılmış ve belirli bir düzeyde kurutulmuş besiyeri üzerine damlatılır, yayma yapılmadan besiyerinin damlayı emmesi beklenir. Dolayısı ile koloniler sadece yaklaşık 2-3 cm kadar çapı olan bir alanda yoğun ve bu nedenle küçük olarak gelişir

Spor Sayımı Bazı hallerde, sadece bakteri sporlarının sayımı gerekebilir. Sporlar da, vejetatif hücreler gibi, agarlı besiyerlerinde kültürel sayım yöntemleri ile sayılırlar. Ancak önce, kültürdeki vejetatif hücrelerin öldürülmesi gereklidir. Bu amaçla spor sayımı yapılacak materyal 80 C’da 1 dakika tutulur. Bu sırada, tercihen su banyosundaki suyun sıcaklığını rahatlıkla iletecek ince kenarlı tüp kullanılmalıdır. 80 C’da 1 dakikalık sıcaklık uygulaması, ortamda bulunan vejetatif hücreleri öldürürken, sporların çimlenmesini teşvik eder. Bundan sonra bilinen dilüsyon ve ekim yapılır

DENEY