Gen Mühendisliği ve Veteriner Hekimlikte Biyoteknoloji

Slides:



Advertisements
Benzer bir sunumlar
In vitro DNA AMPLİFİKASYONU PCR
Advertisements

(Polymerase Chain Reaction)
Mastarlar.
PROTEİNLERDEKİ AMİNO ASİT BİLEŞİMİNİN BELİRLENMESİ
Entegre Savaş Zararlı ve hastalık etmenlerine karşı kullanılan çeşitli yöntemlerin birbirini tamamlayıcı, ekosistemdeki dengeyi koruyucu şekilde uygulanmaları...
BİYOÇEŞİTLİLİK NEDİR Biyoçeşitlilik, bir bölgedeki genlerin, türlerin, ekosistemlerin ve ekolojik olayların oluşturduğu bir bütündür. Başka bir deyişle.
6.SINIF FEN ÖDEVİ. Uygulanan yalıtım kalınlığına ve kullanılan malzemenin ısı iletkenliğine bağlı olarak, ısı kaybı % oranında azaltılır. Yoğuşma.
Avukatlık sözleşmesi. Sözleşmenin tarafları Bu sözleşmenin tarafları; baro levhasına kayıtlı ve işten yasaklanmamış avukat ile ondan hukuksal yardım talep.
Bilimsel bilgi Diğer bilgi türlerinden farklı
MOLEKÜLER BİYOLOJİDE KULLANILAN YÖNTEMLER II:
EĞİTSEL OYUNLAR DOÇ. DR. GÜLTEN HERGÜNER BÖLÜM: 4
Türkiyedeki iklim çeşitleri Doğa Sever 10/F Coğrafya Performans.
Arş.Gör.İrfan DOĞAN.  Bugün otizm tedavisinde en önemli yaklaşım, özel eğitim ve davranış tedavileridir.  Tedavi planı kişiden kişiye değişmektedir,
Hazırlayan: Musa Yıldız Hazırlayan: Musa Yıldız Erciyes Üniversitesi Biyoloji Bölümü Erciyes Üniversitesi Biyoloji Bölümü.
YAKUP KAYA SABİT BAĞLANTILAR SABİT BAĞLANTILAR 1.MEKANİKSEL EKLER 1.MEKANİKSEL EKLER 2.FÜZYON EKLER 2.FÜZYON EKLER.
(YÖNETİCİ MOLEKÜLLER= ÇEKİRDEK ASİTLERİ= DNA ve RNA)
Arasınav ders ve temaları. Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı , Bahar, Trakya Üniv Tıp Fak 6. Kurul, Neşe Akış, PhD, Tıbbi Mikrobiyoloji.
Sözsüz İletişimin Özellikleri
MADDENİN DEĞİŞİMİ VE TANINMASI. SU HALDEN HALE GİRER İlkbaharda hava sıcaklıkların artması ile yükseklerde bulunan karlar az almaya başlar.Eriyen karlar.
5 Su kimyası ve su arıtımı ile ilgili olarak öğrenciler; 5.1. Sert su, yumuşak su kavramlarını anlar ve sertliğin neden istenmeyen bir özellik olduğunu.
HAZIRLAYANIN; ADI SOYADI; İLVE ÇEBİ NUMARA:
1) Aşağıdakilerden hangisi canlıların ortak özelliklerinden değildir? A) Boşaltım B) Sindirim C) Oksijenli Solunum D) Üreme E) Metabolizma.
MAYOZ BÖLÜNME. Mayoz bölünme bitki, insan ve hayvanlarda üreme hücrelerinin (sperm, yumurta ve polen) oluşturulmasını sağlar. Canlıların üreme organlarında.
MAYOZ BÖLÜNME. MAYOZ BÖLÜNME:Bitki, insan ve hayvanlarda üreme hücrelerinin (Sperm, Yumurta ve Polen) oluşturulmasını sağlar. Canlıların üreme organlarında.
Pazarlama İlkeleri.
FİLAMENT İPLİK ÜRETİMİ
PROTEİNLER. PROTEİNLER PROTEİNLER Karbon,hidrojen,oksijen ve azot elementlerinden oluşmuş organik bileşiklerdir. Yapısında bazen sülfür,fosfor veya.
GÖKADALAR (GALAKSİLER)
FOTOSENTEZ HIZINA ETKİ EDEN FAKTÖRLER
Polimerase Chain Reaction
COĞRAFİ KONUM.
PLASMİDLER Bir çok bakteri, kromozomlarından hariç, plasmid olarak adlandırılan küçük non-kromozomal DNA moleküllerine sahiptir. Plasmidler, genellikle.
DNA’nın İzolasyonu ve Analizi
Hazırlayan: Meltem ÖZCAN
FNP GRUBU: fatma ışık, nagehan öztürk, pınar sevindik
B- GENETİK MÜHENDİSLİĞİ ve REKOMBİNANT ÜRÜNLER
IR SPEKTROKOPİSİ.
Ünite- 1 Vücudumuz ve Sistemler
Hayvan refahına uygun koşulların belirlenmesi
GENİN TEMEL FONKSİYONLARI: 2. TRANSKRİPSİYON
GEN MUTASYONU, DNA ONARIMI VE YER DEĞİŞTİREN GENETİK ELEMENTLER
Polimorfizm/Mutasyon tarama teknikleri
Faj Vektörler 8-25 kb arası fragmentleri etkin olarak taşıyabilirler
FİNANSÇI OLMAYANLAR İÇİN FİNANS
TEMEL GEOMETRİK KAVRAMLAR VE ÇİZİMLER
BİYOİNFORMATİK NEDİR? BİYOİNFORMATİKTE KULLANILAN SINIFLAMA YÖNTEMLERİ
Atomlar birleştiği zaman elektron dağılımındaki değişmelerin bir sonucu olarak kimyasal bağlar meydana gelir. Üç çeşit temel bağ vardır:
Necator americanus ve Ancylostoma doudenale
GELECEK PİYASASI İŞLEMLERİ
Kalıtsal madde (kalıtsal molekül, genetik materyal)
MADDENİN DEĞİŞİMİ VE TANINMASI
Sözleşme Sözleşme Türleri
Bitkilerde Fonksiyonel Genombilim
NİŞANTAŞI ÜNİVERSİTESİ
METALİK BAĞ Metal atomlarını bir arada tutan bağdır. Metallerde değerlik elektronları atom tarafından çok zayıf bir şekilde tutulur. Çünkü çekirdeğe uzaklıkları.
Ölçü transformatorları
Isı Enerjisi ve Gerekliliği
Problemler – Kültür Sırasında Problemler
PROTEİN SENTEZİ. PROTEİN SENTEZİ Protein Sentezi’nin Basamakları TRANSKRİPSİYON TRANSLASYON.
ÖLÇME-DEĞERLENDİRME 1.DERS
SPORDA TEKNİK ve TAKTİK ÖĞRETİM YÖNTEMLERİ
KALITIM VE ÇEVRE I. Kalıtım II. Çevre
ARACILI GEN AKTARMA YÖNTEMİ - Agrobacterium tumefaciens -
MAYOZ HÜCRE BÖLÜNMESİ.
DOKU KÜLTÜRÜ VE BİYOTEKNOLOJİ İLE İLGİLİ PROBLEMLER
Agrobacterium tumefaciens Aracılığıyla Bitkilere Gen Aktarımı
Evren-Örneklem, Örnekleme Yöntemleri 1
FOTOSENTEZ.
Prof.Dr. ASuman Sunguroğlu
A.Ü. GAMA MYO. Elektrik ve Enerji Bölümü
Sunum transkripti:

Gen Mühendisliği ve Veteriner Hekimlikte Biyoteknoloji Yrd. Doç. Dr. Bengi ÇINAR KUL

Polimeraz Zincir Reaksiyonu Gen klonlamak için her zaman canlı hücreye mi gerek duyarız? Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) PCR gen klonlamadan oldukça farklıdır. Canlı hücreye gerek duymaz

PCR Polymerase Chain Reaction Polimeraz Zincir Reaksiyonu, DNA’nın belirli bir bölgesinin tüp içinde çoğaltılması işlemidir. Bu teknik ile DNA molekülünün milyonlarca hatta milyarlarca kopyasını yapmak mümkündür.

Replikasyonun laboratuar ortamında taklit edilmesidir. Çift sarmal DNA açılır DNA polimeraz enzimi yeni ve komplementer iplikçiği üretir.

PCR’ın aşamaları 1- DENATÜRASYON 2- PRİMER BAĞLANMASI DÖNGÜ 3- UZAMA

1- DENATÜRASYON Çift sarmal DNA’nın yüksek sıcaklık altında (93-96⁰C) çözülerek tek zincir hale geçmesidir. Hidrojen bağlarının kırılmasıyla olmaktadır. Ortamdaki tüm DNA sarmalları tek zincir haline geçtiğinde reaksiyon tamamlanır.

2- PRİMER BAĞLANMASI Sıcaklık düştükçe (54-70 ⁰C ) tekli DNA iplikçikleri birbirine eşleşir. Eğer ortamda hedef bölgeye komplementer ve kısa bir DNA dizisi varsa , tüm iplikçiğin eşleşmesindense öncelikli olarak kısa iplikle eşleşme olacaktır. Bu kısa iplikçik primerdir!!

İleri ve geri yönlü primerlerle ilgili bölge sınırlandırılır. Primerler 18-25 bazlık tek iplikçikli DNA dizileridir. İçerdikleri bazlara göre bağlanma sıcaklıkları değişir.

Bir döngü sonunda her DNA iki katına çıkmış olur!!! 3- UZAMA Sıcaklık tekrar yükseltilir ve DNA polimeraz enzimi, primerlerin ucuna kalıp DNA’ya eşlenik bazlar (dNTP) ekleyerek yeni DNA iplikçiğini uzatır. DNA polimeraz sıcaklığa dayanıklı olmak zorunda Örneğin Thermus aquaticus’dan Taq DNA polymerase optimum çalışma sıcaklığı 72⁰C Bir döngü sonunda her DNA iki katına çıkmış olur!!!

Her döngüde 2n

animasyon

PCR Reaksiyonu için gerekli olanlar Kalıp DNA Primerler Sıcaklığa dirençli polymerase Taq Polymerase dNTP (dATP, dTTP, dCTP, dGTP) Tampon çözelti +mg++ Thermocyler (ısı döngü cihazı) Thermus aquaticus

PCR değişkenleri Sıcaklık--- primerin bağlanma sıcaklığı ve kullanılan DNA polimerazın çalıştığı sıcaklıklar farklı olabilir Aşamaların uzunlukları ve döngü sayısı--- hedef bölgenin büyüklüğüne göre değişir Primer ---hedef DNA’ya göre baz dizileri, bağlanma sıcaklığı değişir. Tm sıcaklığı önemlidir : bazların yarısının bağlı olduğu sıcaklık. Buna göre en uygun bağlanma sıcaklığı belirlenir…. Her deneye ve laboratuara göre farklı olabilir. Tampon çözelti ve MgCl2--- DNA polimerazın aktif olabilmesi için gerekli olan iyon dengesini sağlar. Polimeraz enzimi --- ticari olarak çeşitli enzimler bulunmaktadır, hata oranları, çalıştıkları sıcaklıklar ve yoğunluklar farklı olabilir.

PCR ın sınırları… Primerlerin doğru pozisyona bağlanması için bu bağlanma yerlerinin dizileri bilinmelidir. Bağlanma yerinin dizisi bilinmiyorsa primerler yapılamaz, PCR daha önce çalışılmamış genleri izole etmekte kullanılmaz

PCR ın sınırları… 2. PCR la kopyalanabilen DNA dizilerinin uzunluğu sınırlıdır. 5 kb (kilobaz) oldukça kolay kopyalanabilir 40 kb lik bölge özel tekniklerle kopyalanabilir Eğer uzun bir genin tamamına ait DNA dizisi gerekliyse klonlama kullanılmalıdır.