Mikrobiyoloji Laboratuvarı Ders 5 Arş. Gör. Ayşenur YAZICI Erzurum Teknik Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü 2017

Gram Boyama: b) Gram negative: Gram positive: Mikrobiyolojide en önemli boyama yöntemdir. Bu boyama bakterileri iki büyük sınıfa ayırır. b) Gram negative: KIRMIZI Gram positive: MOR

Gram Boyama Hans Christian Gram tarafından 1882 yılında uygulanan boyama tekniğidir. Bakteri tanımlamada kullanılan ilk teknik olarak çok önemlidir. Gram boyamanın temeli, bakterilerin hücre duvarı farklılıklarıdır.

Bakterilerin 2 Büyük Sınıfı Bakteriler hücre duvarı yapılarının farklılığından dolayı gruba ayrılırlar. The Gram stain procedure distinguishes between Gram positive and Gram negative groups by coloring these cells red or violet. Gram positive bacteria stain violet due to the presence of a thick layer of peptidoglycan in their cell walls Gram Pozitif

Gram Negatif

Bakteri Morfolojileri

Değişik Morfoloji Tipleri

Kompleks boyama olan Gram boyama 3 aşamadan oluşur. Slide smear Hazırlama: Bakteri örneklerinin lam üzerine hazırlanması, fikse edilmesi. Gram boyama: Sıra ile boyamaların yapılması. Görüntünün alınması: Mor renkli görülen bakteriler Gram (+), pembe renkli görülenler ise Gram ( - ) bakterilerdir.

Fiksasyon Petri kaplarından veya eğik tüp kültürlerinden alınan mikroorganizma örnekleri slide üzerine yayılarak fiksasyon yapılır. Burada çok hücre alınmamalıdır. İnce bir tabaka halinde örnekler havada veya alevden geçirilerek sabitlenir. Bu işleme fiksasyon denir.

Gram Boyama

Deney Videosu https://www.youtube.com/watch?v=sxa46xKfIOY

Deneyin Yapılışı: Sıvı ve katı kültür ortamından öze ile alınıp lam üzerine yayılan bakteri kültürünün havada kuruması sağlanır. 3 defa alevden geçirilerek fiziksel tesbit yapılır. Lam ( preparat ) boya kabına konarak, kristal viyole ile 1 dakika boyanır. 1 dakika sonra kristal viyole boya kabına dökülür. Lam üzerinde kalan boya üzerine lugol ilavesi yapılır. 1 dakika beklenir. 1 dakika sonra boya kaba dökülerek, % 95' lik Etil Alkol ve su ile boya akmayıncaya kadar yıkama İşlemi yapılır. Bu işlemden sonra lam üzerine (preparat) safranin dökülerek 15-20 saniye dakika beklenir. Boya dökülüp, lam yıkanarak kurulanır. Bir damla immersiyon yağı damlatılarak mikroskopla incelenir ( 100 x ). Objektif sahasında görülen mor renkli bakteriler Gram (+), pembe renkli olanlar ise Gram ( - ) olarak adlandırılır.

Sonuç