Sunum yükleniyor. Lütfen bekleyiniz

Sunum yükleniyor. Lütfen bekleyiniz

DİLUSYON ve VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI. Dilüsyonlar; Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır. Konsantre solüsyondan, dilüe.

Benzer bir sunumlar


... konulu sunumlar: "DİLUSYON ve VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI. Dilüsyonlar; Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır. Konsantre solüsyondan, dilüe."— Sunum transkripti:

1 DİLUSYON ve VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI

2 Dilüsyonlar; Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır. Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır. 1/10 luk dilüsyon demek; 1 kısım konsantre 9 kısım dilüent 9 kısım dilüent Ör; 1/5 kan dilüe edeceksek; 1 kısım kan 4 kısım SF 4 kısım SF

3 SORU; 1/5 dilusyon nasıl hazırlanır? SORU; 1/5 dilusyon nasıl hazırlanır? 1 kısım serum 5 kısım total hacim Örneğin; Total hacim 250 mikrolitre olacak şekilde serumu 1/5 nasıl dilue edebiliriz? Olacak şekilde istenen hacimde serum veya diğer biyolojik sıvılar dilue edilebilir. 1 kısım serum 5 kısım total X mikrolitre serum 250 mikrolitre total hacim Cevap: 50 mikrolitre serum alınır, üzerine 200 mikrolitre distile su ilave edilerek, 250 ml lik dilusyon elde edilmiş olur

4 Soru; 500 ml total hacimde, 1/4 dilusyon ile idrar hazırlandı, idrardan ne kadar alınmıştır? Soru; 500 ml total hacimde, 1/4 dilusyon ile idrar hazırlandı, idrardan ne kadar alınmıştır? Cevap; 1 kısım idrar 4 kısım total 4 kısım total X ml idrar 500 ml total 125 ml idrar alınır, üzerine 375 ml distile su eklenerek toplam 500 ml lik dilusyon elde edilmiş olur

5 Tüpte 15 ml NaCl çözeltisi ve 3 ml serum mevcut. Soru; serum dilusyon oranı nedir? Soru; serum dilusyon oranı nedir? 3 ml serum ml serum 3/181/6 Soru;1/ 6 olacak şekilde serumu çeşitli şekillerde dilue ediniz Örneğin; 10 mikrolitre serum alınır, 50 mikrolitre SF ile dilue edilir (total hacim 60 mikrolitre oldu (1/6) Ya da 20 mikrolitre serum alınır, 100 mikrolitre SF ilave edilir (total hacim 120 mikrolitre oldu 20/120 1/6)

6 VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI Kan sayım cihazlarında aşırı uçta çıkan sonuçların periferik yayma ve neubauer lamı/thoma lamı ile yapılacak bir sayım ile teyit edilmesi hataları önlemek açısından önem taşımaktadır. Cihazda saydırılamayacak az miktarda sıvı,kan,idrar gibi örnekler de neubauer lamında sayılabilir. Hücre sayımı, gerektiğinde kan dışındaki vücut sıvılarında da yapılabilir (örn; BOS, çeşitli mayiler, idrar…)

7 HÜCRE SAYIMI Neubauer lamı (hemositometresi) üzerinde iki sayım alanı bulunur. Bu iki sayım alanı bir çukurluk ile birbirlerinden ayrılmıştır. Her bir sayım alanında köşelerde dört tane 1 mm2'lik bölümler (büyük kareler) bulunur. Bunlar 16 tane orta büyüklükte kareye ayrılmıştır. (lökosit sayımı için) Ortada bulunan büyük kare ise 25 tane orta büyüklükte kareye ayrılmıştır (eritrosit sayımı için). Thoma lamıNeubauer lamı

8 LL L L E Neubauer lamı

9 DİLÜSYON SIVILARI Eritrosit dilüsyon sıvısı olarak hayem sıvısı kullanılır. (5 gr. Sodyum Sülfat, 1gr. Sodyum Klorür, 0.5 gr. Civa Biklorür ve 200 ml distile su içinde hazırlanır). Bu sıvı, lökositleri ortamdan kaldırarak sadece eritrositlerin sayılmasını sağlar. Lökosit dilüsyon sıvısı olarak; 3ml Glasiyel Asetik Asit, 1ml Gentian Violet'in (%1'lik çözeltisi) ve 100ml distile su içindeki karışımı kullanılır. Bu eriyik de eritrositleri ortamdan kaldırır ve lökositlerin çekirdeklerini maviye boyayarak kolay görünmelerini sağlar. Fakat sulandırma için sadece SF de kullanılabilir.

10 Eritrosit sayımı Kan 1: 200 veya 1:100 oranında dilusyon sıvısı ile dilue edilir. Neubauer lamı üzerine temiz bir lamel yerleştirilir. Karışımdan 10 mikrolitre alınıp, lamelin altından Neubauer lamına pipetlenir. Kan hızla, lamel ile Neubauer lamındaki çizgili alan arasına dolar. Hücrelerin yerleşmesi için 1-2 dk beklenir. Mikroskopta 100x büyütmede hücrelerin düzgün dağılıp dağılmadığı kontrol edilir ve Mikroskop, sayım için 400x büyütmeye ayarlanır. Eritrositler, Neubauer lamının ortasında bulunan 25 karede sayılır. LL L L E

11 Eritrosit sayımı Pipetleme sonrasında eritrositler, Neubauer lamının ortasındaki 1mm2 lik alandaki 25 karede sayılır (karelerin her birinin alanı 0,04mm2).. Eritrosit sayısı/mm 3 : 25 karede 50 tane saydığımızı farzedelim; Eritrosit sayısı X 10 (sabit sayı) = 50 X 10= 500 eritrosit/mm 3 sonucunu buluruz. LL L L E Eğer dilüsyon yaptıysak, en son çıkan sonucu dilüsyon faktörü ile çarparız. Yukardaki örnekte x5 dilüsyon yaptık diyelim, 500 bulduğumuz sonucu 5 ile çarparız, sonuç: 2500 RBC/mm 3 olur.

12 LL L L E Örneğin çok berrak bir BOS geldi, homojen hale getirip (hafif ters düz edip) neubauer lamına pipetledik (dilüsyon yok). Orta 25 karede toplam 1 tane eritrosit gördük. Sonuç: 1 X 10 = 10 eritrosit/mm 3 ’tür. Örneğin, kanlı bir BOS geldi, x200 dilüsyon yaptık. Neubauer lamına pipetledik. Ve orta 25 karede 40 eritrosit saydık. 40 x 10 (sabit sayı) = 400. Dilüsyon faktörü ile de çarparsak, 400 x 200 = eritrosit/mm 3 sonucunu buluruz.

13 Eritrosit sayımı Bu karelerin 25’inin hepsinin sayılması yerine rastgele 5 tanesi de sayılıp 5 ile çarpılabilir. En mantıklı olan, köşelerdeki ve ortadaki alandır. 25’e göre hesap yapıldığı için, 5 ile çarpmak gerekir. Eritrosit sayısı/mm 3 : Örneğin, 5 küçük karede toplam 2 eritrosit gördük diyelim; 2x5= 10 eritrosit (25 karede) Sonuç: 10 x 10 = 100 eritrosit/mm 3 Eğer dilüsyon yaptıysak, en son çıkan sonucu dilüsyon faktörü ile çarparız. Yukardaki örnekte x10 dilüsyon yaptık diyelim, 100 bulduğumuz sonucu 10 ile çarparız, sonuç: 1000 RBC/mm 3 olur.

14 1: 200 dilusyonda, 5 kare eritrosit sayıldığında ; Sayılan eritrosit sayısı x dilusyon (200) Sayılan karelerin alanı ( mm2) x derinlik (mm) = 5 x 0,04 (mm2) 0,1 (mm) = x sayılan eritrosit sayısı / mm3

15 Örneğin bir tamkan geldi, tamkan cihazı bozuk ve eritrosit sayısı isteniyor; Hemoliz var mı diye kontrol ettik, hemoliz olmadığından emin olduktan sonra, x800 dilüsyon yaptık ve neubauer lamında sayım yaptık. (orta 25 karede) 600 eritrosit saydık. Hesap ???

16 Eritrosit normal değer: kadında 4, erkekte Örnek tamkan sayımı: Lökosit13,32 bin/mm 3 Eritrosit4,8 milyon/mm 3 Hemoglobin11,2 g/dl Hematokrit32.5 % Platelet200 bin/mm 3 Sizin bulduğunuz sonuç: Cihazdan çıkan sonuç:

17 Lökosit sayımı Genel teknik eritrosit sayımı ile aynıdır. Sadece sayım alanı farklıdır. Kan, 1/20 oranında dilusyon sıvısı ile dilue edilir. Neubauer lamı üzerine temiz bir lamel yerleştirilir. Karışımdan 10 mikrolitre alınıp, lamelin altından Neubauer lamına pipetlenir. Hücrelerin yerleşmesi için 1-2 dk beklenir. Mikroskopta 100x büyütmede hücrelerin düzgün dağılıp dağılmadığı kontrol edilir ve Mikroskop, sayım için 400x büyütmeye ayarlanır. LL L L E

18 LL L L E Neubauer lamı

19 Dört büyük lökosit sayım alanından biri, hesap için gereklidir. Dört büyük alandan tercih edilen birisi sayılabilir. LL L L E Diyelim ki, berrak bir BOS geldi, dilüsyona gerek kalmadan direk neubauer lamına pipetledik. Bir lökosit alanında 3 lökosit saydık. (Aynı sabit sayı olan 10 burada da geçerlidir). 3 x 10 = 30 lökosit/mm 3 diye sonuç veririz. LL L L E Örneğin, berrak BOS sayımı için, iki alan saydık diyelim. Toplam 5 lökosit saydık. Bir alan için 2,5 olur. 2,5 x 10 = 25 lökosit/mm 3 sonucunu buluruz.

20 LL L L E Örneğin, berrak bir mayi geldi. Dilüsyona gerek kalmadan mayiyi homojen hale getirip neubauer lamına pipetledik. 4 büyük alanda toplam 5 lökosit saydık. Bir alan için 5/4= 1,25 lökosit buluruz. 1,25 x 10 = 12,5 lökosit/mm 3 sonucunu buluruz. Dört büyük kareyi sayıp 4’e bölmek daha sağlıklıdır. Çünkü hücreler homojen ya da orantılı dağılmamış olabilir. O yüzden 4 büyük alan sayılır. Dörde bölünür. Asıl sonuç budur. Ve sabit sayı 10 ile çarpılır.

21 Toplam sayılan alan 4 mm2 dir. (4 büyük karenin toplam alanı) Lökosit sayısı / mm3; Sayılan lökosit x dilusyon Sayılan alan ( mm2) x derinlik (mm) = = Köşelerdeki 4 büyük karenin sayıldığı düşünülürse; Sayılan lökosit x dilüsyon faktörü 4 ( mm2) x 0.1 (mm)

22 Lökosit sayımı Örneğin (x20 dilüsyonla) 4 büyük karede toplam hücre sayısı 8 olsun. Toplam lökosit sayısı nedir? Cevap 1 Sayılan lökosit x 20 Sayılan alan ( mm2) x 0,1 (mm) = 8 x 20 4 x 0,1 = 400 lök/mm 3 Cevap 2 4 büyük karede toplam 8 hücre vardır Bir karede ortalama 8/4= 2 hücre var demektir. 2x10 (sabit sayı)= 20 lökosit/mm 3 20 x 20 (dilüsyon faktörü) = 400 lökosit/mm 3

23 Örneğin, bulanık bir BOS geldi. X 50 dilüsyon yaptık ve neubauer lamında 4 büyük alanda toplam 130 lökosit saydık. Sonuç nedir?

24 4 büyük alanda 130 lökosit saydıysak, 1 alan için 130/4 = 32,5 lökosit/mm 3 buluruz. 32,5 lökosit x 10 (sbt) = 325 lokosit/mm 3 Fakat bir de bu BOS’u sulandırdığımız için sulandırma faktörü ile çarparız. 325 x 50 = lökosit/mm 3

25 27 L33 L 35 L 25 L Soru: Lökosit sayımı için mor tüp geldi, SF ile x20 dilüsyon yapıp neubauer lamında sayım yaptık. 4 büyük alanda 25, 35, 27, 33 lökosit saydık. Sonucu nasıl rapor ederiz?

26 Cevap: =120 Bir alan için 120/4= 30 lökosit/mm3 30 x 10 = 300 lökosit/mm3 300 x 20 (dil.f.) = 6000 lökosit/mm3 lökosit normal değer: Örnek tamkan sayımı: Lökosit6 bin/mm3 Eritrosit4,16 milyon/mm3 Hemoglobin11,2 g/dl Hematokrit32.5 % Platelet200 bin/mm3

27 Trombosit sayımı Trombositler yabancı maddelere ve birbirlerine karşı yapışkanlıkları fazla olduğundan ve de çok küçük hücreler olduklarından sayılmaları zordur. Genelde bu yöntemle sayılmazlar, kan sayım cihazları ile sayımları tercih edilir Bu yöntemle kan 1:100 dilue edilir ve eritrositlerin sayma alanında sayım yapılır.


"DİLUSYON ve VÜCUT SIVILARINDA HÜCRE SAYIMI. Dilüsyonlar; Konsantre solüsyondan, dilüe solüsyon hazırlamak için kullanılır. Konsantre solüsyondan, dilüe." indir ppt

Benzer bir sunumlar


Google Reklamları