Embriyo Seçimi İçin Yeni Teknolojiler Ersan Dönmez Memorial Ataşehir Hastanesi Üreme Sağlığı Bölümü
Embriyo Değerlendirmesinde Temel Amaçlar İyi kalitede embriyoların transfer için seçilmesi Gebelik oranlarının yükseltilmesi Gebelik kayıplarının önlenmesi Çoğul gebeliklerin önlenmesi Dondurulacak embriyoların seçilmesi Fertilizasyon sonrası embriyoların takip edilmesi (multinükleasyon vs embriyo transferinin önlenmesi)
IVF’ de Morfolojik Embriyo Değerlendirmesi Pronukleus morfolojisi Hücre sayısı Hücrelerin eşit büyüklükte olması (even -uneven) Fragmantasyon miktarı Blastosist morfolofisi (ICM, trofektoderm)
Pronuklear polarizasyon İyi kalitedeki embryo pronukleusunda olması gereken özellikler: Nukleolar prekursor cisimcik İri ve 3-5 adet NPC her iki PN da polarize, Pronukleus aksisinden en uzakta olan PB nin 50o az olmasi. β Enjeksiyon sonrasi 16. – 18. saat
Embryo Morfolojisi & Fragmantasyon GrI GrII GrIII GrIV Blastomerler (even) eşit büyüklükte Fragmantasyon yok
Blastokist Değerlendirme Kriterleri Veeck L. L. 2000 Hücrelerin Açılması ve Hatching Durumu ICM (İç Hücre Kitlesi) Değerlendirmesi Trofoektoderm Değerlendirmesi
IVF’ de Morfolojik Embriyo Değerlendirmesi Erken klivaj Çok çekirdeklilik (multinucleation)
Erken Klivaj Inseminasyondan sonra, 25-27. saatlerde 2 hücreli embriyo Yüksek implantasyon ve blastosiste gidiş oranı
Erken Klivaj
Erken Klivaj
Erken Klivaj
Multinukleasyon
Multinukleasyon
Multinukleasyon
Multinukleasyon
Erken Kompaksiyon
Erken Kompaksiyon
Erken Kompaksiyon
Erken Kompaksiyon
Graduated Embryo Scoring (GES)
Graduated Embryo Score (GES) Degerlen-dirme Inseminasyon sonrasi Embryo bolunmesinde onemli donemler Puan 1 16-18 Pronukleus polarizasyonu 20 2 44-46 Bolunme duzenli ve simetrik 30 Fragmentasyon: Yok <20% >20% 25 3 64-67 Hucre Sayisi & Kalite: 7GrI, 8GrII, , 9GrI,7GrII, 9GrII, 10-11, GrI-GrII 10 Total 100 Fisch et al., Fertility and Sterility, 2001 & 2003
Graduated Embryo Score (GES) Hasta Sayisi 1635 Ortalama yas (SD) 34 ± 4.3 Toplam 2 PN 18675 Blastosist safhasina kulture edilen embryo sayisi 14745
GES ve Implantasyon Oranları
GES + Soluble HLA-G
HLA-G: Non-classical major histocompatibility complex (MHC) antigen. Cytotrophoblast hücreleri tarafından üretilir. Fetusu maternel immun sistem etkilerinden korur.
Soluble HLA-G: S HLA-G Preimplantasyon dönemde, embryo tarafından da salgılandığı, embryo bölünmesini hızlandırdığı, ve implantasyon potansiyelini arttırdığı gösterilmiştir. sHLA-G,embryonun implantasyonunda endometrium ile iletisimi sağlar. Özellikle CD8 T hücrelerinin zararlı etkisini ortadan kaldırarak apaptosisi önler. Jurisicova et al.
GES + Soluble HLA-G
GES + Soluble HLA-G
GES + s HLA-G Implantasyon ve gebelik oranlarını arttırmakta ve transfer için en uygun tek embryonun seçimine yardımcı olmaktadır. Çalışma süresi uzun Maliyet yüksek
METABOLOMİKSLER
METABOLOMİK NEDİR? Metabolom; küçük moleküller, ATP, yağ asidi, glikoz, kolesterol, hormonlar ve diğer sinyal molekülleri ve sekonder metabolitlerin tam dökümünden oluşan biyolojik örneklerdir. 34
METABOLOMİKLER Metabolomik; Genomik ve Proteomik alanlarından gelişen bir daldır. Genomik; DNA zincirindeki bilgilerin analizi, Proteomik; proteinlerin analizi 35
METABOLİTLERİN TANIMLANMASI? 1- Ayırma metodları Gaz kromotografisi (GC) Yüksek Basınçlı Sıvı Kromotografisi (HPLC) Kapiller Elektroforezi (CE) 2- Tarama yöntemleri Kütle spektrometre (MS) Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi (NMR) Fourier Transform infrared spektroskopisi (FTIR) RAMAN ve near infrared spektroskopisi (NIR) 36
İnsan metabolom projesi (HMP,2005) Metabolomik çalışmalar için çeşitli işbirlikleri oluşturulmuştur. İlk olarak başlayan ve tamamlanan proje İnsan Metabolom Projesi (Human Metabolome Project)’dir. (http://www.metabolomicssociety.org ) 37
Metabolitlere göre embriyo seçimi Embriyolardaki metabolomik profilin non-invazif bir yöntemle incelenmesi tek embriyo transferi ile elde edilebilecek implantasyonun başarı oranı hakkında veri sağlaması amaçlanmıştır. IVF’deki non-invazif metabolomik profili embriyo gelişmesinde ve seçim prosedüründe de etkilidir ve böylece gebelik oranlarına ödün vermeden embriyo transfer sayısı düşürülebilir. 38 38
Embriyo kültür ortamından Metabolomik örnek alımı 39
A) C=C, SH NH bağları sarı sütunlarda sırası ile incelenmiş. Biyoinformatik analiz yapılmış. B)Biyoinformatik analize göre implantasyon indeksi oluşturulmuş. 20 kültür ortamı örneği kullanılmış. Mavi: non-viable embriyo Kırmızı: viable embriyo (Bu gruplardaki örneklerin hassaslığı ve özgüllüğü sırasıyla %100 ve %90 duyarlıdır.) 40
Tek embryo transferi 3.gün: 304 olgu 2.gün: 181 olgu Viability Index: 0.3 (<0.3 ; ≥0.3) Morfolojiden bağımsız tüm embryolar incelenmis
Toplam implantasyon oranları(2-3.gün)
3.Gün ET
2.Gün ET
3. gün tek ET 309 olgu (2 veya daha fazla en iyi kalitede embryoya sahip) Kontrol: 163 olgu, Çalışma:146 olgu Gebelik oranları Kontrol grubu: %41.7 Çalışma grubu: %41.8