PCR-SSCP Yöntemiyle, Türk Charcot-Marie-Tooth Hastalarının MPZ, PMP22 ve Cx32 Genlerinin Mutasyon Analizi Ayaz Najafov, İbrahim Barış, Esra Battaloğlu.

... konulu sunumlar: "PCR-SSCP Yöntemiyle, Türk Charcot-Marie-Tooth Hastalarının MPZ, PMP22 ve Cx32 Genlerinin Mutasyon Analizi Ayaz Najafov, İbrahim Barış, Esra Battaloğlu."— Sunum transkripti:

1 PCR-SSCP Yöntemiyle, Türk Charcot-Marie-Tooth Hastalarının MPZ, PMP22 ve Cx32 Genlerinin Mutasyon Analizi Ayaz Najafov, İbrahim Barış, Esra Battaloğlu Boğazici Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü

2 CMT Nedir? Charcot-Marie-Tooth (CMT) = Herediter Motor ve Duysal Nöropati (HSMN) Görülme frekansı ~ 1/2500 Distal kol ve bacak kas zayıflığı ve duysal bozukluklar Genetiksel ve kliniksel olarak heterojen bir hastalıktır 17 farklı gen Otozomal baskın, otozomal çekinik ve X-linked

3 Gen-Hastalık Gen Sebep Olduğu Hastalık Myelin Protein Zero (MPZ)
CMT1B, CMT2, DSS Peripheral Myelin Protein 22 (PMP22) CMT1A, DSS, HNPP Connexin 32 (Cx32) CMTX

4 3 genin taranması 51 hastanın subtype tanımlanması MPZ, PMP22 ve Cx32
PCR-SSCP noktasal mutasyonlar

5 PMP22 17p12-11.2 ~40 kb = 2 intron ve 4 ekson 160 aa / 22 kDa protein
4 transmembran bölge Miyelin proteinlerinin 5-10% Schwann hücrelerinin ER’unda anlatılıyor Farklılaşmış Schwann hücrelerinin Go fazında devamlılığı Adhesyonda fonksiyon Noktasal mutasyonlar ve gen kopya dozu

6 MPZ 1q22~23 7 Kb / 6 ekson 219 aa / ~28 kDa protein
1 transmembran bölge İmmunoglobulin ailesinin üyesi Miyelin proteinlerinin 50-60% Periferik sinir miyelinin yapısı ve fonksiyonu Kültür hücrelerinde hemofilik adhesiyonu sağlıyor Diğer Schwann hücresi proteinlerinin doğru yerlere dağıtılması

7 Cx32 Xq13.1 283 aa / ~32 kDa protein 2 kodlamayan (alternatif spicing ile doku-spesifik anlatılıyor) ve 1 kodlayan ekson var 4 transmembran bölge, 1 hücreiçi ve 2 hücredışı bölge ve termini Gap junction proteinleri ailesi Gap junctionlar’ın bozulması halinde, önemli hücreiçi pathway’ların bozuluyor

8 Metotlar + Hasta genomik DNA’sı Bir eksonun PCR ürünü
2% agarose gel check 8% non-denaturing acrylamide:bisacrylamide (29:1) gels SSCP boyası: Formamide, EDTA, BPB, XC PCR ürünü + 16 saat oda sıcaklığında 10-15V/cm 0.6X TBE buffer Gümüş nitrat boyaması

9 Sonuçlar

10 Sonuçlar – Dizi Analizi

11 Sonuçlar – Restriksiyon Analizi

12 Sonuçlar P126 no’lu hastada, Cx32 geninin ikinci eksonunda, ikinci hücredışı bölgesini etkileyen hemizigot 556 GA 186 glutaminelysine mutasyonu bulundu. P180 no’lu hastanın Cx32 geninde yeni mutasyon çeşidi bulundu: 472 CA (Pro158Thr).

13 Tartışma 2/51, ~4% henüz belirlenmemiş genetik bölgeler
SSCP tekniğinin mutasyon tespit edebilme yüzdesi Gliserol (5%) bazı fragmanlar için olumlu, bazıları için ise olumsuz sonuçlar verdi.

14 Referanslar Baris I., 2002, “Short Tandem Repeat And Mutation Analyses In Turkish Charcot-Marie-Tooth Patients”, MS Thesis, Bogazici University, Department of Molecular Biology and Genetics. Shapiro, H., J. P. Doyle, P. Hensley, D. R. Colman and W. A. Hendrickson, 1996, “ Crystal Structure of the Extracellular Domain from P0, the Major Structural Protein of Peripheral Nerve Myelin”, Neuron, Vol. 17, pp Filbin, M. T., F. S. Walsh, B. D. Trapp, J. A. Pizzey and G. I. Tennekoon, 1990, “Role of Myelin P0 Protein as a Homophilic Adhesion Molecule”, Nature, Vol. 344, pp Giese, K. P., R. Martini, G. Lemke, P. Soriano and M. Schachner, “Mouse P0 Gene Disruption Leads to Hypomyelination, Abnormal Expression of Recognition Molecules, and Degeneration of Myelin and Axons”, Cell, Vol. 71, pp