Fonksiyonlarına Göre Vektör Tipleri Promotor sonda vektörleri Terminatör sonda vektörleri Salgı sinyal vektörleri Klon vektörleri İfade vektörleri Kromozomal entegrasyon vektörleri
Klonlanan DNA’nın Çoğaltılması ve Rekombinant Hücrenin Seçimi Amfisilin içeren ortamda gelişemeyen hücre ORI Amp R ORI Amp R. Pazmid vektör DNA ilavesi Bakteri hücresine aktarım ve seçim (amfisilin direç) Amfisilin içeren ortamda gelişen hücre + Rekombinant plazmid Klonlanacak DNA parçası Bacterial chromosome Bağımsız plazmid replikasyonu Hücre Çoğalması
İki antibiyotik dirençlilik durumunda insersiyonel İnaktivasyon Ampr Tcr ori pBR322 B X B B Tcr Ampr Ampr X B ori ori Amfisilin direnç ? + + Tetrasiklin direnç ? - +
Replica plating (Eş ekim) yöntemi (eleme) Transformasyondan sonra hücreler önce amfisilin içeren ortama ekilir Amfisiline dirençli koloniler 2. Aşamada tetrasiklin içeren ortama ekilir +amfisilin + amfisilin + tetrasiklin Bu koloniler rekombinant plazmidi içermektedir
Replica plating (Eş ekim) yöntemi (seçme) Transforme edilen hücreler tetrasiklin ve sikloserin bulunan ortama aktarılır.Tetrasiklin duyarlı hücreler ölmez, ancak çoğalmaları engellenir (bakteriyostatik etki). Tetrasiklin dirençli hücreler gelişir ancak bu hücreler de sikloserin etkisiyle öldürülür. Bu ortamdaki hücreler daha sonra amfisilin içeren ortama aktarılır. Burada gelişen koloniler amfisilin dirençli ve tetrasiklin duyarlıdır( dolayısı ile yalnız rekombinant plazmidi içerirler) Amfisilin içeren besiyerinde gelişen Rekombinant koloniler