Fonksiyonlarına Göre Vektör Tipleri

... konulu sunumlar: "Fonksiyonlarına Göre Vektör Tipleri"— Sunum transkripti:

1 Fonksiyonlarına Göre Vektör Tipleri
Promotor sonda vektörleri Terminatör sonda vektörleri Salgı sinyal vektörleri Klon vektörleri İfade vektörleri Kromozomal entegrasyon vektörleri

2 Klonlanan DNA’nın Çoğaltılması ve Rekombinant Hücrenin Seçimi
Amfisilin içeren ortamda gelişemeyen hücre ORI Amp R ORI Amp R. Pazmid vektör DNA ilavesi Bakteri hücresine aktarım ve seçim (amfisilin direç) Amfisilin içeren ortamda gelişen hücre + Rekombinant plazmid Klonlanacak DNA parçası Bacterial chromosome Bağımsız plazmid replikasyonu Hücre Çoğalması

3 İki antibiyotik dirençlilik durumunda insersiyonel İnaktivasyon
Ampr Tcr ori pBR322 B X B B Tcr Ampr Ampr X B ori ori Amfisilin direnç ? Tetrasiklin direnç ?

4 Replica plating (Eş ekim) yöntemi (eleme)
Transformasyondan sonra hücreler önce amfisilin içeren ortama ekilir Amfisiline dirençli koloniler 2. Aşamada tetrasiklin içeren ortama ekilir +amfisilin + amfisilin + tetrasiklin Bu koloniler rekombinant plazmidi içermektedir

5 Replica plating (Eş ekim) yöntemi (seçme)
Transforme edilen hücreler tetrasiklin ve sikloserin bulunan ortama aktarılır.Tetrasiklin duyarlı hücreler ölmez, ancak çoğalmaları engellenir (bakteriyostatik etki). Tetrasiklin dirençli hücreler gelişir ancak bu hücreler de sikloserin etkisiyle öldürülür. Bu ortamdaki hücreler daha sonra amfisilin içeren ortama aktarılır. Burada gelişen koloniler amfisilin dirençli ve tetrasiklin duyarlıdır( dolayısı ile yalnız rekombinant plazmidi içerirler) Amfisilin içeren besiyerinde gelişen Rekombinant koloniler