DNA Parmak İzi Prosedürü

Her grup için tüpler DNA Parmak İzi

Her tüp 10 µl DNA örneği içerir 70 µl Enzim Karışımı 0,24 g Agaroz Şüpheli 1 – 5 Her tüp 10 µl DNA örneği içerir 70 µl Enzim Karışımı 10 µl Suçlu DNA Öreneği 0,24 g Agaroz 80 µl Boyayıcı 10 µl Marker DNA Parmak İzi

1. Restriksiyonun Hazırlanmansı DNA Parmak İzi

Dikkat! Deneydeki kirliliği ve bozulmayı önleyebilmek için pipet uçlarını yalnızca bir kez kullanın. Tüpleri karışmaları için en az 30 saniye boyunca döndürün. DNA Parmak İzi

1. DNA Örneği İçeren Tüpler CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl DNA-Fingerprint

1.1 Her tüpe pipet ile 10 µl enzim karışımı ekleyin CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Enzim- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Karışımı(ENZ) DNA Parmak İzi

2. Restriksiyon Sindirim Test tüpleri inkübatöre yerleştirin ve su banyosu içerisinde 37°C’de 20 dakika bekletin. DNA Parmak İzi

3. Elektroforez’in Hazırlanması DNA Parmak İzi

3.1 Elektroforez Odacığının Hazırlanması Tarak Metal Levha Kızak Kızak, metal levha ve tarağı elektroforez odacığının içerisine yerleştirin. DNA Parmak İzi

3.2 Agaroz Jelin Hazırlanması(0,8%) 250 ml erlenmayerin içerisine 0,24 g agaroz + 30 ml TAE-boyayıcısı koyun. Kısa bir süre erlenmayeri mikrodalga fırında kaynatın, karıştırın ve tekrar kaynatın. DNA Parmak İzi

3.3 Jelin Dökülmesi 55 °C’de jeli jel kutusunun içerisine dökün. Dikkat: Test Sıcaklığı elinizin üstü ile kontrol edin. Jel katılaşana kadar hareket ettirmeyin. DNA Parmak İzi

3.4 Odacığın Hazırlanması Jel katılaştıktan sonra elektroforez odacığının metal plakasını sökün. Odacığı 27F ml TAE boyayıcısı ile jelin üzerini kaplayacak şekilde doldurun. Tarağı çekin. DNA Parmak İzi

4. DNA Markerının Hazırlanması Pipet ile 10 µl tamponu (LB) 10 µl marker’a (M) ekleyin. DNA Parmak İzi

5. 10 µl Tamponun Eklenmesi 10 µl tamponu CS ve S1-S5’e pipet ile ekleyin. 10 µl 10 µl 10 µl DNA Parmak İzi

6. Kuyuların Doldurulması Sol kuyu boş kalmalı. Her örnekten 20 µl ve 20 µl marker’ı kuyulara doldurun. Sırayı Unutmayın! Kuyular: sağdan sola doğru doldurun DNA Parmak İzi

6. Kuyuların Doldurulması Dikkat: Jel kuyuları delik olmamalıdır. DNA Parmak İzi

7. Jel Elektroforezi (120 V ca. 30 dakika) Mavi bantlar jelin sonuna ulaşmadan 1 cm önce elektroforezi durdurun. DNA Parmak İzi

8. DNA’nın Renklendirilmesi Jeli reklendirici çanağa aktarın ve 60 ml renklendirici çözelti 2 dakika ile kaplayın. Renklendirici çözeltiyi erlenmayerin içerisine dökün. DNA Parmak İzi

9. Jeli Analiz Edin. Süphelilerden hangisi suçlu? CS S1 S2 S3 S4 S5 M DNA Parmak İzi

9. Sonuç DNA Parmak İzi